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結(jié)合此前你關(guān)注的小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)污染預(yù)防相關(guān)背景,針對已發(fā)生的污染,需先判斷污染類型,再采取對應(yīng)處理方案,同時做好環(huán)境消殺避免擴散。
1. 細菌污染處理
早期輕微污染:換用含高濃度雙抗(青霉素-鏈霉素終濃度100 U/mL)的培養(yǎng)基,也可搭配專用細胞除菌劑,處理24-48小時后換液,連續(xù)觀察2代細胞狀態(tài)。
嚴重污染:直接丟棄污染細胞,用75%酒精徹底擦拭超凈臺、培養(yǎng)箱,對水盤進行換水消殺,防止耐藥菌擴散。
2. 真菌污染處理
輕微污染:用PBS輕柔潤洗細胞2-3次,換用含300μg/mL氟康唑的培養(yǎng)基培養(yǎng)至傳代,再降至150μg/mL維持培養(yǎng)2-3代,后續(xù)正常傳代觀察3-5代確認無復(fù)發(fā)。
污染擴散:真菌污染通常難以徹底根除,非珍貴細胞建議直接丟棄,用殺孢子劑對細胞間、培養(yǎng)箱進行全面消殺,清除殘留真菌孢子。
3. 支原體污染處理
珍貴細胞處理:選用商品化支原體清除試劑(如MRA),按說明書比例加入培養(yǎng)基,連續(xù)處理3代細胞以上,也可配合細胞反復(fù)離心洗滌法輔助清除。
常規(guī)細胞:直接丟棄污染細胞,復(fù)蘇原始凍存的無支原體種子細胞,后續(xù)定期用qPCR法抽檢細胞,避免隱性污染影響實驗結(jié)果。
4. 通用收尾操作
所有污染處理操作需在隔離的超凈臺內(nèi)完成,避免污染其他正常細胞;處理完成后對整個細胞培養(yǎng)環(huán)境進行全面消殺,確認無殘留污染源后再恢復(fù)常規(guī)培養(yǎng)操作。
1. 細菌污染處理
早期輕微污染:換用含高濃度雙抗(青霉素-鏈霉素終濃度100 U/mL)的培養(yǎng)基,也可搭配專用細胞除菌劑,處理24-48小時后換液,連續(xù)觀察2代細胞狀態(tài)。
嚴重污染:直接丟棄污染細胞,用75%酒精徹底擦拭超凈臺、培養(yǎng)箱,對水盤進行換水消殺,防止耐藥菌擴散。
2. 真菌污染處理
輕微污染:用PBS輕柔潤洗細胞2-3次,換用含300μg/mL氟康唑的培養(yǎng)基培養(yǎng)至傳代,再降至150μg/mL維持培養(yǎng)2-3代,后續(xù)正常傳代觀察3-5代確認無復(fù)發(fā)。
污染擴散:真菌污染通常難以徹底根除,非珍貴細胞建議直接丟棄,用殺孢子劑對細胞間、培養(yǎng)箱進行全面消殺,清除殘留真菌孢子。
3. 支原體污染處理
珍貴細胞處理:選用商品化支原體清除試劑(如MRA),按說明書比例加入培養(yǎng)基,連續(xù)處理3代細胞以上,也可配合細胞反復(fù)離心洗滌法輔助清除。
常規(guī)細胞:直接丟棄污染細胞,復(fù)蘇原始凍存的無支原體種子細胞,后續(xù)定期用qPCR法抽檢細胞,避免隱性污染影響實驗結(jié)果。
4. 通用收尾操作
所有污染處理操作需在隔離的超凈臺內(nèi)完成,避免污染其他正常細胞;處理完成后對整個細胞培養(yǎng)環(huán)境進行全面消殺,確認無殘留污染源后再恢復(fù)常規(guī)培養(yǎng)操作。
